小鼠CD4+ 细胞分选试剂盒（阳选）
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阳选法试剂盒是利用纳米磁珠标记和富集目的细胞，再用释放剂将磁珠从细胞表面解离，从而得到无磁珠标记的目标细胞。
- 产品货号:70904-10
- 产品单位:盒
- 产品说明:for 1*10^8 cells
产品特点
• 纯度达到95%以上
• 样本适用性广，可直接捕获目的细胞
• 磁珠释放技术细胞无磁珠标记
产品信息
应用案例
图1 BeaverBeads® 小鼠CD4+ 细胞分选试剂盒（阳选法）分选小鼠脾脏细胞，流式细胞仪分析图
利用BeaverBeads® 小鼠CD4+ 细胞分选试剂盒（阳选法）从BALB/c小鼠脾脏细胞中分选CD4+细胞，用PE anti-mouse CD4抗体（克隆号RM4-4）标记后进行流式细胞仪分析。
结论：分选前后的CD4+细胞纯度分别为13.3%和97.2% 。
与美天旎对比如何？
相同点：均能实现高纯度、高活性的细胞分选。
不同点：美天旎磁珠因磁珠粒径小，磁性弱，需要搭配分选柱进行磁性的放大才能实现细胞分离，操作时长约30-60分钟（分选柱需预冲洗、上样、洗涤等步骤）。海狸细胞分选试剂盒不需要分选柱，仅需磁力架搭配流式管，最快15分钟（阴选法）即可分离细胞。
普通的磁力架可以用于细胞分选吗？
用于细胞分选磁力架的磁场强度要>7000Gs，否则会影响细胞分选效果。
推荐海狸细胞分选磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分选T细胞，样本处理时要活化吗（加刀豆蛋白活化）？
我们未对激活处理后的脾脏或淋巴细胞进行T细胞分选验证。
从理论上讲，阴选方式由于不直接结合目标细胞，通常不受激活处理影响；而阳性选择则可能受到一定影响，尤其是在T细胞激活后某些表面标志物表达发生变化的情况下，可能存在洗脱效率降低的风险。
建议客户在完成细胞分选后再进行激活处理，可以确保分选效果和细胞状态的稳定性。
一个试剂盒可以分选几个小鼠脾脏？
正常情况下，一个脾脏大概的细胞数量是5x10*7-1x10*8。
但细胞数量与鼠龄、小鼠品系还有单细胞悬液制备都有关系.
试剂盒里的biotin antibody mix，有没有封闭Fc受体（FcR）？
没有封闭Fc受体
可以分选出原代细胞吗？
可以，海狸的细胞分选试剂盒，从组织或者其他样本里分选出来的都是原代细胞。
细胞圈门的时候是把所有的细胞都圈入的吗?
圈所有染上色的细胞，（要看染的部位，细胞碎片、死细胞染不上）。
E1左下角细胞碎片不要圈，P1圈对角线（单个核细胞）
散点图在流式上比较分散的原因？
可能是磁吸不充分导致的，可以延长磁吸时间或更换磁性更强的磁力架（＞7000Gs）。
做细胞分选用哪款磁珠？
我们自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做细胞分选，包括阳选和阴选。
目前有客户用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分选，效果也很好。
细胞分选试剂盒中的磁珠洗涤步骤是否可以用磁力架吸附代替离心？
可以，使用磁性吸附洗涤比离心洗涤效果更好。
细胞分选说明书上要求4℃环境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分选buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分选buffer时建议使用0.5 M的液体EDTA。原因：固体的EDTA比较难溶解，溶解后也可能会有肉眼看不到的颗粒，所以要过0.22μm的滤膜，但过滤膜可能会损失掉部分EDTA，所以建议用液体的。
为什么海狸的试剂盒需要裂红后再进行分选？
因为抗体mix中只有少量的红细胞抗体，防止有红细胞残留，所以需要裂红。
阴选和阳选试剂盒中抗体的区别？
阳选中只有一种抗体，即针对目的细胞的抗体；阴选中是抗体mix，含有多种针对非目标细胞的抗体。
阳选与阴选的区别
阳选法：适用样本类型多种、复杂，抗体类型单一，需要解离试剂，直接捕获，细胞没有磁珠标记，有抗体标记，操作时长最快80min，不需要分离柱。
阴选法：适用样本类型相对单一，抗体类型为多种抗体的混合物，不需要解离试剂；间接捕获，不影响细胞性能；细胞没有磁珠标记和抗体标记，操作时长最快25min，不需要分离柱。
分选buffer的配方是什么？海狸可以提供吗？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer。
细胞样品制备时需要几次过筛？具体步骤是什么？
推荐进行2次过筛。
第一次过筛：将样本置于70 μm细胞筛网筛网上进行研磨/冲洗，收集细胞。
第二次过筛：裂红完成后，使用PBS重悬细胞，将细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤。
若只进行1次过筛，残留的细胞团块可能会导致细胞/磁珠聚集，降低分选纯度。
磁珠使用前需要清洗吗？不清洗有什么影响？
磁珠使用前需要用分选buffer清洗2次（清洗方法见说明书）；若不清洗，磁珠保存液中的某些组分（如抑菌剂）可能会影响细胞活性。
抗体和细胞孵育时需要注意什么？
将细胞悬液加到离心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混匀（尽量在底部进行吹打，不要溅到管壁上），4°C孵育 10 min（勿将Ep管插进冰里）。
若孵育时间不足，会使抗体与细胞无法充分结合，从而导致非目标细胞残留，影响分选纯度。
磁吸时需要注意什么？
要使用细胞分选专业磁力架，推荐（Cat. No. 60205/60206），静置5分钟，磁吸后转移大部分悬液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸时间过短可能会导致部分磁珠未完全吸附，分选后的细胞中有磁珠残留，且影响分选纯度。
离心条件是否有统一标准？
常规离心条件为500 g，5分钟（磁珠清洗除外，需10000 g，1分钟）。离心速度过大（超过500g）影响细胞活性。
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