小鼠CD8+ T细胞磁珠法分选试剂盒（阴选法）
￥2998.00
- 产品货号:70902-50
- 产品单位:盒
- 产品说明:for 5*10^8 cells
小鼠 CD8+ T 细胞分选试剂盒是通过阴性分选法从小鼠脾脏细胞或其它组织的单细胞悬液中分离出 CD8+ T 细胞。原理是选用不同的生物素（biotin）标记单克隆抗体对非目的细胞（非 CD8+T 细胞）进行标 记，而后通过链霉亲和素（streptavidin）标记的磁珠对非目标细胞进行清除，从而达到小鼠 CD8+ T 细胞 分选的目的。分选过程需要用到磁吸分离器。
产品特点：
简单、快速：15分钟即可分选得到目的细胞；
无需分离柱：使用磁性分离器即可实现目的细胞的快速分离；
高纯度：分选细胞纯度可达95%以上；
高活性：分选后可获得99%以上的活性细胞、且细胞功能良好。
产品使用效果：
图1. BeaverBeads®分选小鼠脾脏CD8+ T细胞后, CD8+ T细胞的纯度检测结果
图1. 使用BeaverBeads Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit (negative selection)从C57BL/6小鼠脾脏细胞中分选CD8+ T细胞。分选前和分选后的细胞用FITC标记的anti-mouse CD8抗体（克隆号53-6.7）染色后进行流式细胞仪分析，分选前后的CD8+ T细胞纯度分别为13.8%和97.1%。
与美天旎对比如何？
相同点：均能实现高纯度、高活性的细胞分选。
不同点：美天旎磁珠因磁珠粒径小，磁性弱，需要搭配分选柱进行磁性的放大才能实现细胞分离，操作时长约30-60分钟（分选柱需预冲洗、上样、洗涤等步骤）。海狸细胞分选试剂盒不需要分选柱，仅需磁力架搭配流式管，最快15分钟（阴选法）即可分离细胞。
普通的磁力架可以用于细胞分选吗？
用于细胞分选磁力架的磁场强度要>7000Gs，否则会影响细胞分选效果。
推荐海狸细胞分选磁力架（Cat.No: 60205，60205Ⅱ，60206）。
分选T细胞，样本处理时要活化吗（加刀豆蛋白活化）？
我们未对激活处理后的脾脏或淋巴细胞进行T细胞分选验证。
从理论上讲，阴选方式由于不直接结合目标细胞，通常不受激活处理影响；而阳性选择则可能受到一定影响，尤其是在T细胞激活后某些表面标志物表达发生变化的情况下，可能存在洗脱效率降低的风险。
建议客户在完成细胞分选后再进行激活处理，可以确保分选效果和细胞状态的稳定性。
一个试剂盒可以分选几个小鼠脾脏？
正常情况下，一个脾脏大概的细胞数量是5x10*7-1x10*8。
但细胞数量与鼠龄、小鼠品系还有单细胞悬液制备都有关系.
试剂盒里的biotin antibody mix，有没有封闭Fc受体（FcR）？
没有封闭Fc受体
可以分选出原代细胞吗？
可以，海狸的细胞分选试剂盒，从组织或者其他样本里分选出来的都是原代细胞。
细胞圈门的时候是把所有的细胞都圈入的吗?
圈所有染上色的细胞，（要看染的部位，细胞碎片、死细胞染不上）。
E1左下角细胞碎片不要圈，P1圈对角线（单个核细胞）
散点图在流式上比较分散的原因？
可能是磁吸不充分导致的，可以延长磁吸时间或更换磁性更强的磁力架（＞7000Gs）。
做细胞分选用哪款磁珠？
我们自己用的300 nm的SA（Cat. No. 22308C）做细胞分选，包括阳选和阴选。
目前有客户用的1μm SA（Cat. No. 22307）自己做分选，效果也很好。
细胞分选试剂盒中的磁珠洗涤步骤是否可以用磁力架吸附代替离心？
可以，使用磁性吸附洗涤比离心洗涤效果更好。
细胞分选说明书上要求4℃环境操作，是否可以在冰上操作？
可以。
分选buffer的配方是什么？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer（Cat. No. 80301）。
自己配制分选buffer时建议使用0.5 M的液体EDTA。原因：固体的EDTA比较难溶解，溶解后也可能会有肉眼看不到的颗粒，所以要过0.22μm的滤膜，但过滤膜可能会损失掉部分EDTA，所以建议用液体的。
为什么海狸的试剂盒需要裂红后再进行分选？
因为抗体mix中只有少量的红细胞抗体，防止有红细胞残留，所以需要裂红。
阴选和阳选试剂盒中抗体的区别？
阳选中只有一种抗体，即针对目的细胞的抗体；阴选中是抗体mix，含有多种针对非目标细胞的抗体。
阳选与阴选的区别
阳选法：适用样本类型多种、复杂，抗体类型单一，需要解离试剂，直接捕获，细胞没有磁珠标记，有抗体标记，操作时长最快80min，不需要分离柱。
阴选法：适用样本类型相对单一，抗体类型为多种抗体的混合物，不需要解离试剂；间接捕获，不影响细胞性能；细胞没有磁珠标记和抗体标记，操作时长最快25min，不需要分离柱。
分选buffer的配方是什么？海狸可以提供吗？
含有2 mM EDTA和2% 胎牛血清（FBS）的PBS或者含有2 mM EDTA和0.5% BSA的PBS，需预先通过0.22μm滤膜过滤除菌。可以联系海狸生物购买预配制的分选buffer。
细胞样品制备时需要几次过筛？具体步骤是什么？
推荐进行2次过筛。
第一次过筛：将样本置于70 μm细胞筛网筛网上进行研磨/冲洗，收集细胞。
第二次过筛：裂红完成后，使用PBS重悬细胞，将细胞悬液用70 μm细胞筛网过滤。
若只进行1次过筛，残留的细胞团块可能会导致细胞/磁珠聚集，降低分选纯度。
磁珠使用前需要清洗吗？不清洗有什么影响？
磁珠使用前需要用分选buffer清洗2次（清洗方法见说明书）；若不清洗，磁珠保存液中的某些组分（如抑菌剂）可能会影响细胞活性。
抗体和细胞孵育时需要注意什么？
将细胞悬液加到离心管底部，再加入Biotin-Antibody Mix，充分吹打混匀（尽量在底部进行吹打，不要溅到管壁上），4°C孵育 10 min（勿将Ep管插进冰里）。
若孵育时间不足，会使抗体与细胞无法充分结合，从而导致非目标细胞残留，影响分选纯度。
磁吸时需要注意什么？
要使用细胞分选专业磁力架，推荐（Cat. No. 60205/60206），静置5分钟，磁吸后转移大部分悬液至新管，注意不要吸到磁珠。磁吸时间过短可能会导致部分磁珠未完全吸附，分选后的细胞中有磁珠残留，且影响分选纯度。
离心条件是否有统一标准？
常规离心条件为500 g，5分钟（磁珠清洗除外，需10000 g，1分钟）。离心速度过大（超过500g）影响细胞活性。
小鼠CD8+ T细胞磁珠法分选试剂盒（阴选法）可以用胸腺细胞吗？分选效率低的原因？
不建议使用胸腺样本，阴选试剂盒对样本要求比较严格，只适合脾脏和淋巴结。阴选是抗体结合非目的细胞，胸腺中非目的细胞的种类可能多于脾脏和淋巴结，所以效率低。
可以试用阳选试剂盒，但分选出来的是CD4+细胞（包含CD4+T细胞），不全是CD4+T细胞。同样，阴选试剂盒不适和分选双阳性细胞（CD4+T和CD8+T细胞）。
哪款磁珠可以用于细胞激活？
如果用于T细胞激活，推荐5μm SA（Cat. No. 22306）和5μm （Cat. No. 70105）羧基磁珠。
小鼠CD8+T细胞磁珠法分选试剂盒可以用于肿瘤细胞吗？
理论上可以使用小鼠CD8+细胞磁珠法分选试剂盒（阳选法）（Cat. No. 70905）。
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